key: cord-1014760-orudsycg authors: Ferchal, F.; Colimon, R.; Roseto, A.; Desjeux, J. F.; Perol, Y. title: Recherche de virus en microscopie électronique dans les selles d'enfants atteints de gastro-entérite aiguë hivernale date: 1980-04-30 journal: Médecine et Maladies Infectieuses DOI: 10.1016/s0399-077x(80)80049-7 sha: 1f6b9042dccbbb2f608e8729140dd12d5eb7159e doc_id: 1014760 cord_uid: orudsycg Summary During two successive winters, faecal extracts from 110 children under 3 years of age were examined by electron microscopy with negative contrast. In a first group of 22 children hospitalised for various medical disorders, no virus particles were detected. In the second group of 88 children with acute gastroenteritis, we found viruses in 31,8 % of the faecal extracts, Rotavirus were detected in 22,7 % of the specimens and various particles (Adenovirus, Astrovirus, Coronavirus) in 9,1 % of the specimens. Nous avons examin6 au microscope 61ectronique apr~s coloration n6gative au cours de deux hivers successifs 110 selles d'enfants ~g6s de moins de 3 ans dont 88 6taient hospitalis6s pour gastro-ent6rite infantile. Dans le groupe t6moin, constitu6 de 22 enfants hospitalis6s pour des motifs divers pour lesquels la coproculture 6tait pratiqu6e ~ titre syst6matjque, aucun virus n'a 6td mis en 6vidence tandis que les selles d'enfants atteints de gastro-ent6rite 6taient riches en virions dans 31,8 % des cas. Dans 22, 7 % des cas les virions observ6s 6taient des Rotavirus, dans 9,1% des cas il s'agissait de virus divers : Ad6novirus, Astrovirus, Coronavirus. Le diagnostic direct des infections virales par mise en dvidence des virions au microscope 61ectronique dans un produit pathologique (5) a 6t6 utilisd pour le diagnostic rapide des infections virales dermotropes, v6siculeuses ou tumorales, pour mettre en 6vidence une vir6mie, ou pour ddmontrer une virurie. Son application ~ la recherche de virus dans les f6c6s (4) (6) (10) (11) (15) est ~ l'origine de la ddcouverte de virus nouveaux que l'on ne peut encore isoler dans les cellules cultiv6es in vitro et dont le r61e 6tiologique dans |es diarrh6es infantiles est ~ l'6tude (23) . Nous rapportons notre exp6rience portant sur 110 selles d'enfants hospitalis6s pendant deux hirers cons6cutifs. Ils proviennent d'enfants fig6s de 5 jours fi trois ans hospitalis6s dans les services de l'h6pital H6rold. Du ler d~cembre 1977 au ler mars 1978, nous avons examin6 47 selles diarrhdiques adress6es pour recherche de virus avec le diagnostic de gastro-entdrite infantile (GEI) et 22 selles non diarrh6iques adress6es pour coprocultures h titre syst6matique ; celles-ci ont servi de groupe t6moin. Du ler d6cembre 1978 au ler mars 1979, nous avons examin6 41 selles diar-rh6iques adress6es pour recherche de virus avec le diagnostic de GEI. Les selles ont 6t6 recueillies au cours de l'un des quatre premiers jours de la diarrh6e et conser-v6es congel6es g -30 °. I1 est pr6par6 comme suit : 1,5 g de selles est mis dans 2,5 ml de tampon phosphate pH 7,2 (PBS) st6rile. On y ajoute 1,5 ml de trichlorotri-fluoro6thane (Frdon Merck). Apr~s homogdn6isation soigneuse au Vortex, le tube est centrifug6/t + 4 ° pendant une heure ~ 5000 t/mn. On obtient trois couches : une couche inf~rieure form6e du Frdon qui a solubilis6 les substances liposolubles, une couche moyenne ou galette constitu6e des ddbris cellulaires et riche en bact6ries, une couche sup6rieure contenant les virus. Celle-ci est recueillie ~ la pipette et ddpos6e dans un tube stdrile. Cet extrait est utilisable pour rinoculation en cultures cellulaires. Des grilles cuivr6es de 300 -mesch ,,, recouvertes d'un c6t6 d'une pellicule de formwar, de rautre d'une pellicule de carbone, sont pos6es face formwar sur une goutte de surnageant pendant 4 minutes, puis l'exc6s de liquide est absorb6 avec du papier filtre. Sans s6cher totalement la surface, on pose la grille sur une goutte d'acide phosphotungstique/~ 2 % tamponn6 avec de la soude norma[e/t pH 6,2. Apr6s 4 minutes de contact, on sbche compl~tement la grille. Celles-ci sont conserv6es g rabri des poussi~res jusqu'/t l'examen qui peut ~tre diff6r6 de plusieurs jours fi plusieurs semaines. Les grilles sont observdes avec un microscope Philips EM 301 * sous une tension de 60 KV et un grossissement direct de 19000 ~ 34000. L'acide phosphotungstique, opaque aux 61ectrons, dessine en constraste les particules virales et rdv~le leur taille et leur structure ce qui permet d'identifier la famille ou le genre auxquels elles appartiennent. Les principaux crit6res d'identification des virions observ6s sont pr6cis6s dans les 16gendes de l'iconographie. Quand aucune structure virale n'a 6t6 observ6e apr6s 20 minutes d'observation, l'examen est consid6r6 comme n6: gatif. Rotavirus. Diam. 70 nm. Particules en forme de roue h moyeu central icosa6drique. La capside externe lisse est absente ; les bords dentel6s r6pondent ~t la capside interne. GR 170 000. Barre = 100 nm. s d a n s les selles, est d o n c d ' u n g r a n d i n t 6 r 6 t d a n s le d i a g n o s t i c des g a s t r o -e n t 6 r i t e s ai-gu6s car la rapidit6 de ses r6sultats pourrait contribuer ~ limiter la prescription d'antibiotiques inutiles voire nocifs par leur action s61ective sur la flore intestinale. Cependant sa pratique est conditionn6e par un investissement important. Certaines techniques immunoenzymatiques (ELISA) ou radioimmunologiques d6tectent avec une grande sensibilit6 la pr6sence des antig~nes de Rotavirus dans les selles (3). Elles ont de plus l'avantage d'explorer un grand nombre de setles en une journ6e. Mais l'examen en microscopie 61ectronique est le seul qui permette la mise en 6vidence d'autres virus dont l'6pid6miologie et le pouvoir pathogbne sont encore mal connus. L'agencement en cristaux des parois bact6riennes d6grad6es peut interf6rer avec la recherche des virions (9). L'excr6tion d'Ad6novirus dans les selles est habituellement prouv6e par ]eur isolement en cultures cellulaires mais la d6couverte, dans des extraits de selles examin6s au microscope 61ectronique, de trbs nombreux ad6novirions non cultivables au cours de diarrh6es 6pid6miques montre l'int6r6t de cette recherche (10) . Ces observations ont permis d'6tablir le r61e 6tiologique des ad6novirus dans certaines gastro-ent6rites ai-gu6s (10) (26) (32) Des Coronavirus ont 6t6 observ6s pour la premibre fois dans les selles de deux malades au cours d'une 6pid6mie de gastro-ent6rite dans une collectivit6 d'adolescents (8) . Divers auteurs ont confirm6 leur pr6sence dans les selles humaines (21) (25) (27) (28) (31) mais avec une 6gale fr6quence qu'il y ait de la diarrh6e ou non et malgr6 le r61e d6terminant de Coronavirus dans les gastro-ent6rites transmissibles animales, leur pouvoir pathogbne chez l'homme n'est pas d6-montr6. Nos observations confirment le r61e 6tiologique majeur des Rotavirus dans les GEI survenant pendant la p6riode hivernale (7) (12) (13). Cependant le pourcentage de selles riches en Rotavirus est inf6rieur fl celui qu'on rapport6 certains auteurs qui, au cours d'6pid6mies, ont observ6 jusqu'fl 78 % de selles positives (17) . I1 est possible que l'absence d'ultracentrifugation des extraits de selles tels que nous les pr6parons rende compte d'un moins grand nombre de r6sultats positifs. Cependant nos r6sultats sont comparables fl ceux qui ont 6t6 obtenus fl la m6me p6riode ,clans d'autres r6gions de France (29) (19) sur des pr6parations ultracentrifug6es. L'extraction au fr6on (30) a l'avantage d'6tre simple et rapide et d'61iminer les structures provenant de la d6gradation des membranes. L'6pid6miologie des Rotavirus est encore real connue ; on sait cependant que cette infection hivernale varie selon les an-n6es (16) . Nous avons not6 une fr6quence plus grande des infections ~ Rotavirus au cours de l'hiver 77-78 que durant l'hiver 78-79 mais le nombre de cas 6tudi6s est trop faible pour que la diff6rence soit statistiquement significative. Astrovirus associated gastroenteritis in children -Viruses and gastroenteritis in infants Comparison of electron microscopy, enzyme-linked immunosorbent assay, solid phase radioimmunoassay and indirect immunofluorescence for detection of human rotavirus antigen in faeces Detection of a new virus by electron microscopy of faecal extracts from children with acute gastroenteritis -A negative staining method for high resolution electron microscopy of viruses -L'examen des selles en microscopie 61ectronique. Son int6r6t pour le diagnostic de quelques infections virales Responsabilit6 des Rotavirus dans les diarrh6es du nourrisson Coronavirus particles in faeces from patients with gastroenteritis The presence in faecal extracts of bacterial cell wall components resembling viral structures Virus particles in gastroenteritis Diagnostic electron microscopy of faeces I. The viral flora of the faeces as seen by electron microscopy Diagnostic electron microscopy of faeces II. Acute gastroenteritis associated with reovirus like particles -Electron microscopy in the diagnosis of infectious diarrhea -Characterization of non cultivable adenoviruses associated with diarrhea in infants : a new subgroup of human adenoviruses Visualization b3 immune electron microscopy of a 27 nm particle associated with acute infectious non bacterial gastroenteritis New complement fixation test for the human reovirus like agent of infantile gastroenteritis. Nebraska calf diarrhea virus used as antigen -Human reoviruslike agent as the major pathogen associated with << winther gastroenteritis 7, in hospitalised infants and young children Astrovirus associated gastroenteritis in a children's ward Gastro-entdrite aigu6 infan.tile ~t Rotavirus -Visualization by electron microscopy of 28 nm virus particles (Astrovirus) in faeces of newborns with acute non bacterial gastroenteritis Viruses in infantile gastroenteritis (letter) 28 nm particles in faeces in infantile gastroenteritis -Viruses in the stool Comparison of the features of Astroviruses and Caticiviruses seen in samples of faeces by electron microscopy -Pteornorphic virus like particules in human faeces Intestinal damage in Rotavirus and Adenovirus gastroenteritis assessed by D xylose malabsorption Coronaviruses in training center for intellectually retarded Coronavirus et -astrovirus dans les selles d'enfants atteints de gastro-ent6rites Gastro-ent6rites aigu6s infantiles ~t Rotav~rus pendant la saison hivernale de 1978 ~ Marseille Rotavirus et gastro-ent6rite du nouveau-n6. Premibres observations Coronavirus like particles in aboriginals and non aboriginals in western Australia. M Electron microscopy of fatal adenovirus gastroenteritis