key: cord-0724215-2wkq0ha7 authors: Baillargeau, E.; Ranger, S.; Agius, G.; Samb, A; Castets, M.; Rekas, B. title: Détection des rotavirus humains dans les selles : Comparaison de cinq techniques date: 1985-12-31 journal: Médecine et Maladies Infectieuses DOI: 10.1016/s0399-077x(85)80323-1 sha: 358cdb3a599300e2d2ff8d0878862a9643cf6a5f doc_id: 724215 cord_uid: 2wkq0ha7 Summary The authors have tested 118 stools by five techniques used for the detection of rotaviruses in human faeces : electron microscopy, latex agglutination (Slidex Rota-kit : BioMérieux ; Rotalex : Orion Diagnostica) and ELISA (Enzygnost : Behring ; Bio-Enza-Bead : Bionetics). Reproducibility and specificity for all techniques were satisfactory. Comparison of the methods showed Enzygnost to be the most sensitive (89 %), followed by the two agglutination tests, then electron microscopy and least sensitive the Bio-Enza-Bead (56 %). For large — scale screening of faeces, it appeared that the latex agglutination test were preferable for reasons of simplicity, speed and cost. Le rotavirus humain repr~sente le principal agent etio-Iogique des gastro-enterites virales infantiles. Ce virus n'est pas isole en pratique courante, le diagnostic biologique repose donc soit sur la visualisation du virus : microscopie electronique (ME) et immunomicroscopie electronique (I M E), soit sur l a detection des antig~nes viraux. Parmi ces derni~res m~thodes, des tests immunoenzymatiques et d'agglutination au latex ont recemment ete commercialises ; certains sont utilis~s en routine. Cette etude se propose de comparer les performances de deux techniques immunoenzymatiques : Enzygnost (Institut Behring), Bio-EnzaBead (Bionetics) et deux tests au latex : Rotalex (Orion Diagnostica), Slidex Rota-Kit (Bio-Merieux) pour la recherche de rotavirus dans les selles. Cent-dix-huit selles ont ete recueillies chez des enfants ~ges de 2 jours ~ 12 ans admis au C.H.U. : I'antiserum utilise est le serum de contr61e positif pour la fixation du complement (Institut Behring). Les grilles sont sensibilisees par contact avec une dilution au 1/32 de cet antiserum 30 minutes ~ 25°C puis lavees en P.B.S. Elles subissent ensuite le meme traitement que pour la ME. -Techniques au latex : • Slidex Rota-Kit : les selles sont diluees au 1/10 avec le tampon fourni puis homogeneis~es, et laissees au repos 10 minutes avant d'etre centrifug~es 10 minutes 500 g. Deux gouttes de 50 #1 de surnageant,sont deposees *Re£u le 5.9.1985 . Acceptation d~finitive le 17.10.1985 **Laboratoire de Microbiologie B, Centre Hospitalier Universitaire, BP 577, F 86021 Poitiers C~dex ***Laboratoire de Bact~riologie-Virologie, Centre Hospitalier Universitaire, Dakar, S6n~gal s~par~ment sur une lame. L'une est m~lang~e ~ une goutte de latex r~actif et I'autre ~ une goutte de contr61e. La r~action est positive si une agglutination nette est observ~e uniquement avec le latex r~actif ; elle est ininterpr~table si une agglutination est ~galement observ~e avec le r~actif contr6le. Un t~moin positif est inclus dans chaque manipulation. • Rotalex : les ~chantillons sont dilu~s au 1/10 en tampon tris pH 7,4 et homog~n~is~s. Apr6s 30 minutes les suspensions sont centrifug~es ~ 1200 g pendant 20 minutes. Le protocole technique et la lecture de la r~action sont ensuite identiques & ceux du Slidex Rota-Kit. : elles ont ~t~ pratiqu~es selon les protocoles op~ratoires pr~conis~s par les fabricants. Dans les deux cas, il s'agit d'une m~thode sandwich avec utilisation d'un antiserum de lapin anti-SA 11 (rotavirus du singe). Cet anticorps est fix~ sur le fond d'une microplaque en polystyrene pour Enzygnost et sur des billes m~talliques pour Bio-EnzaBead. Les enzymes utilis~es sont la phosphatase alcaline pour Enzygnost et la peroxydase de raifort pour Bio-EnzaBead, Les densit~s optiques sont d~termin~es avec un lecteur Multiskan Titertek (Flow). cordance porte sur 70 selles (59 %) toutes techniques confondues. La sensibilit~ relative de chaque m6thode a ~t~ calcul~e par rapport au nombre de selles positives par au moins une technique : 89 % pour Enzygnost , 84 % pour Slidex Rota-Kit, 72 % pour Rotalex, 60 % pour la ME et 66 % pour Bio-EnzaBead. Un seul ~chi]ntillon s'est montr~ n~gatif par Enzygnost, ME et IME ~tant positives. Les deux tests au latex ont donn~ des r~sultats ininterpr~tables dans 9 % des cas pour Rotalex et 10 % pour Slidex Rota-Kit. Parmi ces selles, 26 % ~taient positives en ME. Les tests d'agglutination ont fourni 5 positivit~s non confirm~es par les autres techniques. La ME est une technique tr6s sp~cifique mais peu sensible (6,8) ; dans notre s~rie parmi les 80 selles n~gatives en ME, 20 ~taient positives par Enzygnost et 16 par au moins une autre technique. Cependant elle permet de visualiser d'autres v!rus responsables de gastro-enterites aigu~s. L'IME nous a apport~ un argument suppl~mentaire dans les cas discordants car elle am~liore la sensibilit~ de la ME (6). L'ensemble des r~sultats est pr~sent~ dans le tableau I. Toute d~termination douteuse a ~t~ recommenc~e. La con-Parmi les tests immunoenzymatiques, Enzygnost et Rotazyme (Abbott) ont ~t~ les plus ~tudi~s (8, 9, 12) et se TABLEAU I (7). La sp~cificit~ du test Bio-Enza-Bead est bonne puisque les 8 ~chantillons de selles n~gatifs en ME et positifs par Bio-EnzaBead ~taient positifs par au moins une autre m~thode. R~cemment, plusieurs tests au latex ont ~t~ commer-cialis~s ~ la suite des travaux de Sanekata (10) et Haikala (2). Les avantages de telles techniques notamment I'acc~s & cette d~termination par des laboratoires non specialists, ont d~j& ~t~ d~crits (1, 3, 6, 9) . Les tests Rotalex et Slidex Rota-kit ont une sensibilit~ interm~diaire entre la ME et les tests immunoenzymatiques (6, 9) Slidex Rota-kit est I~g6rement plus sensible que Rotalex (84 % contre 72 %), fait d~j~ mentionn~ (5, 9) . L'existence de r~actions inin-terpr~tables, agglutination apparaissant ~ la fois avec le latex r~actif et le latex contrble, repr~sente le probl~me essentiel d'interpr~tation de ces tests. Dans ce travail, les deux tests ont ~t~ affect~s avec la m~me fr~quence par ce ph~nom6ne alors que d'autres auteurs donnent un avantage au Slidex Rota-kit (5, 9) . Dans notre s~rie, 5 selles ont donn~ des r~actions positives par les techniques au latex et n~gatives par les autres techniques. De tels cas de figures, d~j& rapport~s pour Rotalex (1, 9) The authors have tested 118 stools by five techniques used for the detection of rotaviruses in human faeces : electron microscopy, latex agglutination (Slidex Rota-kit : BioM#rieux ; Rotalex : Orion Diagnostica) and ELISA (Enzygnost : Behring ; Bio-Enza-Bead : Bionetics). Reproducibility and specificity for all techniques were satisfactory. C ~enparison of the methods showed Enzygnost to be the most sensitive (89 %), followed by the two agglutination tests, then electron microscopy and least sensitive the Bio-Enza-Bead (56 %). For large -scale screening of faeces, it appeared that the latex agglutination test were preferable for reasons of simplicity, speed and cost. D~-tection rapide des rotavirus dans les selles Rapid detection of rotavirus in stool by latex agglutination : comparison with radioimmunoassay and elee4ron microscopy and clinical evaluation of the test Comparison of direct and indirect enzyme imrnunoassays with direct ultracentHfugation 4 before electron microscopy for detection of rotaviruses Solid-phase enzyme immunoassay for rotavirus antigen: faecal protease activity as a reason for false -negative results Evaluation d'un nouveau test au latex pour d6tecter les retavirus humains dans les selles Comparison of six methods for detecting human rotavirus in stools Detection of a rotavirus -like agent associated with diarrhea in an infant Comparison of an enzyme immunoassay with electron microscopy procedures for detecting rotavirus Direct alJpraisal of latex agglutination testing, a convenient alternative to enzyme immunoassay for the detection of rotavirus in childhood gastroenteritis, by comparison of two enzyme immunoassays and two latex tests Detection of rotavirus in faeces by latex agglutination -Filter paper solid-phase radioimmunoassay for human rotavirus surface immunoglobulins Evaluation of enzyme immunoassays for the detection of human rotevirus